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篇名
生物化學-DNA複製過程,基礎醫學教室
重要考點
聚合反應的特點:
(1)以單鏈DNA為範本;
(2)以dNTP為原料;
(3)引物提供3'-OH;
(4)聚合方向為5' →3';
(5)遵守堿基互補原則。
說明
DNA 半保留複製的體系
原料 dNTP(包括 dATP、dGTP、dCTP、dTTP)
DNA-pol(依賴 DNA 的 DNA 聚合酶,DNA-dependent DNA polymerase)
引子(primer) 提供 3’-OH 末端的 RNA 短片斷
DNA 範本(template) 解開成單鏈的 DNA 母鏈
其他酶 拓撲異構酶、解螺旋酶、單鏈 DNA 結合蛋白(SSB)、引子酶、連接酶(註)

(註)
DNA 拓樸異構酶
(DNA topoisomerase)
(在解鏈過程中,DNA 分子會打結、纏繞等現象,故須 DNA 拓撲異構酶來理順 DNA 鏈。它既能水解,又能連接磷酸雙酯鍵)
DNA 拓撲異構酶-Ⅰ DNA 拓撲異構酶-Ⅱ(主要)
切斷 DNA 雙鏈中一股,使 DNA 解鏈旋轉不致打結;適當時封閉切口,DNA 變為鬆弛狀態。反應不需 ATP 切斷 DNA 分子兩股,斷端通過切口旋轉使超螺旋鬆弛。利用 ATP 供能,連接斷端,DNA 分子進入負超螺旋狀態
引子酶(Primerase) (1)依賴 DNA 的 RNA 聚合酶;
(2)可以催化游離 NTP 聚合;
(3)催化 RNA 引物的生成
單鏈 DNA 結合蛋(SSB) 穩定已解開的單鏈
DNA 連接酶
(DNA ligase)
連接 DNA 鏈 3’-OH 末端和相鄰 DNA 鏈 5’-P 末端,使二者生成磷酸雙酯鍵,故把兩段相鄰的 DNA 鏈連接成一條完整鏈。故在複製中有接合雙鏈中單鏈缺口的作用;此外,在 DNA 修復、重組及剪接中也起縫合缺口作用
解螺旋酶 DnaA 辨認起始點
解螺旋酶 DnaB 解開 DNA 雙鏈
解螺旋酶 DnaC 輔助解螺旋酶 DnaB ,使其在起始點上結合並打開雙鏈
解螺旋酶 DnaG 催化 RNA 引子的生成
【註】DNA 複製酶系作用順序是:DNA 拓撲異構酶→解螺旋酶→SSB→引子酶→DNA 聚合酶→DNA 連接酶
DNA聚合酶
原核生物的 DNA 聚合酶 真核生物的 DNA 聚合酶
  DNA-pol Ⅰ DNA-pol Ⅱ DNA-pol Ⅲ (1)DNA-pol α:起始引發,有引子酶活性,延長遲緩股(lagging strand)
(2)DNA-pol β:無其他 DNA-pol 時起催化作用; 參與低保真度的複製
(3)DNA-pol γ:在線粒體
(4)DNA 複製中起催化作用
(5)DNA-pol δ:複製的主要酶,有解螺旋酶活性,可延長領頭鏈
(6)DNA-pol ε:在複製過程中起校讀、修復、填補缺口作用
5’→3’
聚合酶活性
+ + +
3’→5’
外切酶活性
+ + +
5’→3’
外切酶活性
+ -- --
功能 校讀、參與 DNA 損傷的修復、切除 RNA 引物、填補缺口 在無 pol Ⅰ及 pol Ⅲ的情況下暫時起作用,參與 DNA 損傷的應急狀態修復 延長中新鏈核苷酸的聚合;是複製延長中真正起催化作用的酶
(註)DNA 聚合酶III (DNA-pol III)由 10 種亞基組成的聚合體。其中α、ε、θ亞基組成核心酶,α亞基具有 5’→3’的聚合活性,ε亞基具有 3’→5’外切酶活性,θ亞基起組裝作用,β亞基(DNA 夾子)能夾穩範本鏈,負責酶沿 DNA 範本滑動的作用,其餘亞基統稱為γ-複合物,是 DNA 夾子載入蛋白。
相關考題
(問題來了) 以下題目摘自考選部公佈醫師專技高考試題
1.在E. coli 中修護較大之 DNA 損壞如紫外線照射,是靠:<96-1-52>
  1. UvrA 及UvrB 蛋白尋找破壞之位置結合上去
  2. UvrC 切斷被破壞之鹼基
  3. Apunic endonuclease 切斷DNA一股
  4. DNA 複製3/4 III 修補
解答:A

2.細胞中基因轉錄(transcription)負責各種不同基因的表達。在轉錄的過程中,不需要下列那一項目?<96-2-31>
  1. 核糖核酸聚合酶(RNA polymerase)
  2. 啟動子(promoter)
  3. 去氧核糖核酸聚合酶(DNA polymerase)
  4. 促進子(enhancer)
解答:C

3.在試管中進行polymerase chain reaction(PCR)合成DNA,需要:<96-2-43>
  1. DNA 範本(template),引子(primer),DNA 聚合酶(polymerase)
  2. DNA 範本(template),DNA 解旋酸(helicase),DNA 聚合酶(polymerase)
  3. 引導體(primosome),引子(primer),DNA 聚合酶(polymerase)
  4. 複製叉(replication fork),引子(primer),DNA 聚合酶(polymerase)
解答:A

4.E. coli 修護DNA 複製產生之錯配(mismatch),須靠辨識母股(parental strand)上的何種修飾?<96-2-49>
  1. adenine 甲基化
  2. guanine 甲基化
  3. cytosine 甲基化
  4. thymine 甲基化
解答:A

5.引子(primer)是DNA複製時的必須材料,下列何者為引子的主要功能?<97-1-45>
  1. 誘發DNA生合成的起點及方向,並決定生合成的終點
  2. 可幫助DNA雙螺旋的解旋工作,誘發DNA的生合成
  3. 確定DNA生合成的起點及方向,提供一個羥基(-OH)作為DNA延伸之用
  4. 可決定前導股(leading strand),但無法決定遲緩股(lagging strand)的形成
解答:C

6.下列有關E. coli DNA複製之敘述,何者正確?<97-1-50>
  1. 複製原點(replication origin)附近有許多富含GU之序列
  2. 由DNA聚合酶I負責前導股(leading strand)之合成
  3. 需要從一段RNA引子(primer)開始合成
  4. 單股DNA結合蛋白(single-strand DNA-binding proteins)負責打開雙股
解答:C

7.下列何種酵素活性增加可造成癌細胞無法進行正常細胞的老化現象?<97-2-26>
  1. 去氧核糖核酸聚合酶-甲型(DNA polymerase alpha)
  2. 去氧核糖核酸聚合酶-丁型(DNA polymerase delta)
  3. 去氧核糖核酸接合酶(DNA ligase)
  4. 端粒酶(telomerase)
解答:D

8.下列何種酵素不會參與DNA複製(DNA replication)?<98-2-40>
  1. DNA拓樸異構酶(DNA topoisomerase)
  2. 解螺旋酶(helicase)
  3. 單股DNA鍵結蛋白(single-stranded DNA binding protein)
  4. 依賴DNA的RNA聚合酶(DNA-dependent RNA polymerase)
解答:D

9.在DNA複製中,下列何酵素功能主要是用以增加DNA複製之準確度?<99-1-35>
  1. 單股DNA結合蛋白
  2. 3’→5’外切核酸酶
  3. DNA連接酶
  4. DNA解螺旋酶
解答:B

10.在DNA複製時,原核細胞的primase之功能為:<99-1-41>
  1. 合成RNA的引子,做為DNA合成的啟始
  2. 填補Okazaki片段間的空隙
  3. 作用方向是從3’→5’
  4. 有校正功能
解答:A

11.下列有關DNA複製(DNA replication)的敘述,何者錯誤?<99-2-35>
  1. DNA複製以半保留(semiconservative)模式進行
  2. DNA複製過程中會產生引導股(leading strand)與落後股(lagging strand)
  3. DNA合成(DNA synthesis)由3’往5’端進行
  4. DNA複製後,原始模版(parental strand)與新合成模版(newly synthesized strand)兩股以反向平行(antiparallel)形成雙股結構
解答:C

12.在人類細胞中,DNA複製(DNA replication)時是以何種物質為引子(primer)?<99-2-36>
  1. DNA
  2. RNA
  3. 蛋白質
  4. 不需引子
解答:B

13.有關真核細胞(eukaryotic cells)與原核細胞(prokaryotic cells)DNA複製(DNA replication)的敘述,何者錯誤?<101-1-36>
  1. 皆需引子(primer)
  2. 皆會有引導股(leading strand)與落後股(lagging strand)形成
  3. 皆由一個複製起始點(replication origin)進行所有DNA複製
  4. 皆需DNA連接3/4(DNA ligase)參與
解答:C
關鍵詞
DNA複製、DNA聚合酶、DNA拓樸異構酶、DNA連接酶、RNA聚合酶

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